Creation date in repository: 2019-09-30

Abstract: Durante los últimos 10 años, la presencia de tetrodotoxina (TTX) en mariscos europeos ha sido reportada en numerosos casos. Esta situación ha evidenciado un importante problema de seguridad alimentaria en toda Europa. Hasta la fecha, ninguno de los métodos de cribado para la detección de TTX había sido validado para el análisis de muestras de marisco. Por esa razón, la detección de TTX en mariscos debía realizarse con la tecnología LS-MS/MS. Los elevados costes y la complejidad derivados de esta técnica analítica, impulsó la innovación y la creación de nuevas tecnologías para la detección de TTX en mariscos. De esta innovación, nació el ensayo mELISA. Este inmunoensayo demostró ser válido y específico hacia la TTX, de todas maneras, también evidenció muchos problemas derivados del efecto matriz producido por los extractos de marisco. Por esa razón, en el presente estudio, se evalúa un nuevo protocolo de extracción para su aplicación en el ensayo mELISA con la intención de reducir los efectos de la matriz. Del análisis de los extractos obtenidos con el nuevo protocolo, pudimos establecer unas nuevas concentraciones de trabajo donde el efecto matriz desaparecía. Estas concentraciones de extracto eran: 150 mg/mL (navaja), 25 mg/ml (ostra) y 5 mg/mL (mejillón). Trabajando a esas concentraciones, la detección de TTX con el mELISA solo fue posible en el caso de las ostras y las navajas (concentraciones de detección de 40 μg/kg y 640 μg/kg, respectivamente). Además, también se apreció una ineficiencia en el protocolo de extracción. Cuando se trabajaba con navaja, solo el 70 % de la TTX total presente en las muestras era recuperada después del proceso de extracción y, en el caso de la ostra, esta recuperación era solo del 15 %. Aunque las recuperaciones de TTX no eran altas en todos los casos, se pudo probar que el nuevo protocolo de extracción continuaba siendo válido para la detección de TTX con el mELISA en el caso de la navaja y la ostra. During the last 10 years, the presence of tetrodotoxin (TTX) in European shellfish has been reported in numerous cases. This situation highlighted an important problem of food safety in all Europe. To date, none of the screening methods for the detection of TTX had been validated for the analysis of shellfish samples. For this reason, the analysis had to be performed with LC-MS/MS technology. The elevated costs and complexities derived from this technique boosted the innovation and the creation of new technologies for detection of TTX in shellfish. From this innovation, the mELISA assay was born. This immunoassay proved to be valid and specific to TTX, however, it also showed a lot of problems with the matrix effects produced by the shellfish extracts. In this study, a new extraction protocol has been evaluated for its application on mELISA assay with the aim of reducing the matrix effects. By the analysis of the extract obtained with the new protocol, we were able to set new working concentrations where the matrix effect disappears. These working concentrations are: 150 mg/mL (razor clam), 25 mg/mL (oyster) and 5 mg/mL (mussel). Working with these concentrations, TTX detection with mELISA was only possible with razor clam and oysters (detection concentrations of 40 μg/kg and 640 μg/kg, respectively). We also appreciated an inefficiency of our extraction method. When working with razor clams, only the 70 % of the total TTX present in the samples was recovered after the extraction process, and with oyster’s, the recovery was only 15 %. Although recoveries were not high in all cases, we proved that the new extraction protocol is still valid for the detection of TTX in the case of razor clam and oyster. Durant els darrers 10 anys, la presència de tetrodotoxina (TTX) en mariscs europeus ha estat reportada en nombrosos casos. Aquesta situació ha evidenciat un important problema de seguretat alimentària a tot Europa. Fins ara, cap dels mètodes de cribratge per a la detecció de TTX havia estat validat per a l'anàlisi de mostres de marisc. Per aquesta raó, la detecció de TTX a marisc havia de realitzar-se amb la tecnologia LS-MS/MS. Els costos elevats i la complexitat derivats d'aquesta tècnica analítica van impulsar la innovació i la creació de noves tecnologies per a la detecció de TTX en marisc. D'aquesta innovació va néixer l'assaig mELISA. Aquest immunoassaig va demostrar ser vàlid i específic cap a la TTX, però també va evidenciar molts problemes derivats de l'efecte matriu produït pels extractes de marisc. Per aquesta raó, en aquest estudi, s'avalua un nou protocol d'extracció per aplicar-lo a l'assaig mELISA amb la intenció de reduir els efectes de la matriu. De l'anàlisi dels extractes obtinguts amb el nou protocol, vam poder establir unes concentracions de treball noves on l'efecte matriu desapareixia. Aquestes concentracions d'extracte eren: 150 mg/mL (navalla), 25 mg/ml (ostra) i 5 mg/mL (musclo). Treballant a aquestes concentracions, la detecció de TTX amb el mELISA només va ser possible en el cas de les ostres i les navalles (concentracions de detecció de 40 µg/kg i 640 µg/kg, respectivament). A més, també es va apreciar una ineficiència en el protocol d'extracció. Quan es treballava amb navalla, només el 70% de la TTX total present a les mostres era recuperada després del procés d'extracció i, en el cas de l'ostra, aquesta recuperació només era del 15%. Tot i que les recuperacions de TTX no eren altes en tots els casos, es va poder provar que el nou protocol d'extracció continuava sent vàlid per a la detecció de TTX amb el mELISA en el cas de la navalla i l'ostra.

Subject: Bioquímica i biotecnologia

Language: Castellà

Subject areas: Bioquímica y biotecnología Biochemistry and biotechnology Bioquímica i biotecnologia

Department: Bioquímica i Biotecnologia

Student: Reverté Navarro, Jaume

Academic year: 2018-2019

Title in different languages: Validación de un nuevo protocolo de extracción de tetrodotoxina en muestras de mejillón, ostra y navaja para su aplicación en el ensayo mELISA Validation of a new tetrodotoxin extraction protocol in samples of mussel, oyster and razor clam for its application in mELISA assay Validació d'un nou protocol d'extracció de tetrodotoxina en mostres de musclo, ostra y navalla per a la seva aplicació en l'assaig mELISA

Work's public defense date: 2019-06-28

Access rights: info:eu-repo/semantics/openAccess

Keywords: tetrodotoxina, extracción, mELISA tetrodotoxin, extraction, mELISA tetrodotoxina, extracció, mELISA

Confidenciality: No

TFG credits: 9

Title in original language: Validación de un nuevo protocolo de extracción de tetrodotoxina en muestras de mejillón, ostra y navaja para su aplicación en el ensayo mELISA

Project director: Constantí Garriga, Magdalena; Campàs Homs, Mònica

Education area(s): Biotecnologia

Entity: Universitat Rovira i Virgili (URV)