Temperature modulated genosensor for detection of cystic fibrosis mutations

Nasef, Hany Abdel Hady Abdel Rahman

Descripción:

La memoria de la tesis está organizada en 8 capítulos. Un resumen de cada capítulo se detalla a continuación. El Capítulo 1 es una Introducción, en la que se presenta el estado del arte así como los objetivos de la tesis. En el Capítulo 2 se describe el uso de la impedancia electroquímica a diferentes temperaturas para la discriminación de la mutación DF508 con respecto a la secuencia normal sin mutación. Las sondas de DNA (de 15 y 21 bases de longitud) fueron inmovilizadas en la superficie de los electrodos de oro y de la variación de la resistencia a la transferencia de carga (Rct) fue medida en función de la hibridación. Para la detección se han utilizado dos tipos de secuencias diana: secuencias sintéticas 15 mer y dos análogos sintéticos de productos de PCR de 82 (mutante) y 85 (normal) bases. La hibridación con la secuencia corta resulto en una variaciones de Rct muy específicas a la secuencia estudiada, con un factor de discriminación a temperatura ambiente de 5 veces cuando se comparó la respuesta obtenida con la secuencia totalmente complementaria con respecto a las no coincidentes. Sin embargo, en el caso de los productos de PCR sintéticos de cadena sencilla el factor de discriminación fue menor (1.5 veces). Por ellos, el efecto de la temperatura fue investigado como vía para mejorar la discriminación. El uso de lavados post-hibridación a temperatura elevada dio lugar a una mejora de 5 veces en el factor de discriminación. De esta manera, utilizando arrays de electrodos inmovilizadas con sondas selectivas a las secuencias de tipo mutante y normal, se logró una detección inequívoca de la mutación DF508. En el Capítulo 3 se describe el uso del azul de metileno como indicador electroquímico en la discriminación de la mutación DF508 de fibrosis quística de secuenc

Tipo:

info:eu-repo/semantics/publishedVersion
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis

Coautor:

Departament d'Enginyeria Química
Universitat Rovira i Virgili.

Títol:

Temperature modulated genosensor for detection of cystic fibrosis mutations

Idioma:

eng

Materia:

543 - Química analítica

Formato:

application/pdf

Autor:

Nasef, Hany Abdel Hady Abdel Rahman

Derechos:

info:eu-repo/semantics/openAccess
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Fecha:

2010-03-11

Editor:

Universitat Rovira i Virgili

Materia:

543 - Química analítica

Idioma:

eng

Editor:

Universitat Rovira i Virgili

Fuente:

TDX (Tesis Doctorals en Xarxa)

Identificador:

urn:isbn:9788469333860
http://hdl.handle.net/10803/8585

Formato:

application/pdf

Palabra clave:

genosensor
DF508
Cystic fibrosis

Fecha:	2010-03-11
Departamento/Instituto:	Departament d'Enginyeria Química Universitat Rovira i Virgili.
Director:	O'Sullivan, Ciara Beni, Valerio
Autor:	Nasef, Hany Abdel Hady Abdel Rahman
Título:	Temperature modulated genosensor for detection of cystic fibrosis mutations

Información