Participació de la proteïna mitofusina 2 (mfn2) en la inmortalització i transformació cel·lular

Identificador:  TFG:2941

Handle: https://hdl.handle.net/20.500.11797/TFG2941

Autors:  Páramo Castillejo, Idoia

Resum:
La Mitofusina 2 (Mfn2) es una GTPasa de la membrana externa mitocondrial, clave en el proceso de fusión mitocondrial; cuya deficiencia se ha asociado con algunos tipos de cáncer. Durante el proceso de biogénesis del cáncer se originan un conjunto de cambios de expresión génica, epigenéticos y metabólicos en la célula que conducen a la inmortalización y trasformación celular. Los cambios metabólicos originados en el proceso de inmortalización y trasformación celular incrementan la utilización de aminoácidos, lípidos y glucosa por diferentes rutas metabólicas, a través de mecanismos de reprogramación metabólica celular. Mfn2 parece jugar un papel relevante en la reprogramación metabólica. Nuestro laboratorio ha demostrado que la perdida de función de Mfn2 conduce a un incremento en la utilización de aminoácidos, tales como glutamina y cistina, por la célula. En este proyecto nos interesa investigar en que paso del proceso de inmortalización y/o trasformación celular, la proteína mitocondrial Mfn2 jugaría un papel relevante para conducir a un cambio metabólico requerido para sostener la proliferación celular. Con este fin, generamos una serie de líneas celulares inmortales a partir de cultivos primarios de piel de ratón y humano adulto. Los resultados de este trabajo mostraron que la inmortalización de fibroblastos parentales de humano y ratón, produce un cambio fenotípico, caracterizado por; la disminución del tamaño celular, la formación de grupos de células, y el aumento de la proliferación. Interesantemente, la inmortalización de fibroblastos humanos parentales mediante la expresión de SV40L o Ras G12V, produce un aumento de la expresión de la proteína Mfn2. Similares resultados fueron observados en los fibroblastos de ratón inmortalizadas con SV40L. Para investigar la participación de Mfn2 en el proceso de inmortalización, generamos células humanas knockdown en la expresión de la proteína Mfn2, utilizando un vector lentiviral que expresan un shRNA dirigido al mRNA de Mfn2. Nuestros estudios con cristal violeta mostraron que el silenciamiento de Mfn2 en células inmortales promueve la proliferación celular, indicando que esta proteína podría estar involucrada en potenciar el proceso de transformación celular. Por otra parte, durante la inmortalización con SV40L, se incrementa la expresión de proteínas involucradas en el ciclo de Krebs, tal como la subunidad C de la enzima succinato deshidrogenasa (SDHC), y en el metabolismo de aminoácidos, como la asparagina sintetasa (ASNS), cuyos genes son activados durante la reprogramación metabólica de aminoácidos.