Optimization and automation of a lipidomic analysis of human serum by 1H-NMR

Identifier:  TFG:5614

Handle: https://hdl.handle.net/20.500.11797/TFG5614

Authors:  Homs Aguadé, Pau

Abstract:
La lipidómica, és la ciència que estudia els lípids a gran escala, generant perfils de les diferents famílies lipídiques biogèniques, l’estudi exhaustiu de les seves vies metabòliques i la interpretació de la seva importància fisiològica, basada en tècniques de química analítica i anàlisis estadístiques. Gràcies a la seva importància, en aquest treball es busca optimitzar i automatitzar el protocol d’extracció dels lípids a partir de sèrum humà per a una posterior anàlisi lipidòmica emprant espectroscòpia de ressonància magnètica nuclear de protons. Així, es va analitzar el protocol per detectar dos possibles punts crítics: la liofilització de les mostres i la congelació de la fase orgànica amb solvent d’extracció i sense. No es van observar diferències significatives entre les dues condicions en ambdós casos. En el cas de la liofilització es va observar una predominança de l’efecte biològic sobre l’efecte analític, pel que es va decidir liofilitzar les mostres amb el fi de facilitar l’automatització del procés. En el cas de la congelació, és preferible emmagatzemar la fase orgànica sense els solvents d’extracció, però en cas que no sigui possible, qualsevol conjunt de mostres ha de ser tractat amb les mateixes condicions. Amb la finalitat d’automatitzar el protocol, es va programar el robot dispensador de líquids “Agilent Bravo Automated Liquid Handling Platform” per automatitzar la resuspensió de la mostra desprès de ser liofilitzada i l’extracció de la fase orgànica. Es van observar coeficients de variació menors quan es realitza el protocol automatitzat, així com una superposició quasi perfecta dels espectres de RMN de les alíquotes tractades automàticament, a diferència de les tractades manualment.