Validación de un nuevo protocolo de extracción de tetrodotoxina en muestras de mejillón, ostra y navaja para su aplicación en el ensayo mELISA

Identificador:  TFG:2137

Handle: https://hdl.handle.net/20.500.11797/TFG2137

Autores:  Reverté Navarro, Jaume

Resumen:
Durante los últimos 10 años, la presencia de tetrodotoxina (TTX) en mariscos europeos ha sido reportada en numerosos casos. Esta situación ha evidenciado un importante problema de seguridad alimentaria en toda Europa. Hasta la fecha, ninguno de los métodos de cribado para la detección de TTX había sido validado para el análisis de muestras de marisco. Por esa razón, la detección de TTX en mariscos debía realizarse con la tecnología LS-MS/MS. Los elevados costes y la complejidad derivados de esta técnica analítica, impulsó la innovación y la creación de nuevas tecnologías para la detección de TTX en mariscos. De esta innovación, nació el ensayo mELISA. Este inmunoensayo demostró ser válido y específico hacia la TTX, de todas maneras, también evidenció muchos problemas derivados del efecto matriz producido por los extractos de marisco. Por esa razón, en el presente estudio, se evalúa un nuevo protocolo de extracción para su aplicación en el ensayo mELISA con la intención de reducir los efectos de la matriz. Del análisis de los extractos obtenidos con el nuevo protocolo, pudimos establecer unas nuevas concentraciones de trabajo donde el efecto matriz desaparecía. Estas concentraciones de extracto eran: 150 mg/mL (navaja), 25 mg/ml (ostra) y 5 mg/mL (mejillón). Trabajando a esas concentraciones, la detección de TTX con el mELISA solo fue posible en el caso de las ostras y las navajas (concentraciones de detección de 40 μg/kg y 640 μg/kg, respectivamente). Además, también se apreció una ineficiencia en el protocolo de extracción. Cuando se trabajaba con navaja, solo el 70 % de la TTX total presente en las muestras era recuperada después del proceso de extracción y, en el caso de la ostra, esta recuperación era solo del 15 %. Aunque las recuperaciones de TTX no eran altas en todos los casos, se pudo probar que el nuevo protocolo de extracción continuaba siendo válido para la detección de TTX con el mELISA en el caso de la navaja y la ostra.