Optimizaciones de las condiciones de análisis y validaciones del método de detección y confirmación de péptidos pequeños por LC-MS/MS

Identificador:  TFM:316

Handle: https://hdl.handle.net/20.500.11797/TFM316

Autores:  Sauras Pastor, Victoria

Resumen:
Se ha optimizado y validado un método analítico para la detección de péptidos pequeños en orina humana. Los péptidos pequeños que se analizan son de la família de GHRPS, GHS, GnRH, agentes diuréticos, factores del crecimiento y moduladores de factores del crecimiento los cuales son consumidos por algunos deportistas ya que generan efectos ergogénicos en el cuerpo. El método consiste en una extracción en fase sólida con cartuchos OASIS WCX y la separación por cromatografía líquida acoplada a un masas en tándem (LC-ESI-MS/MS), usando columna C18, (1.7 μm de tamaño de partícula), la fase móvil contiene de solvente A acetonitrilo con 0.1% de ácido fórmico y de solvente B agua MilliQ con 0.1% de ácido fórmico. El programa de gradiente empieza con 5% de solvente A y va incrementando hasta 35% en 8 minutos, hasta el 80% en el minuto 10 y baja hasta el 5% en el siguiente minuto manteniendo las condiciones hasta el minuto 15. La detección se llevó a cabo con ionización por electroesprai en modo positivo monitorizando las dos mejores transiciones, ión precursor - ión producto, específicas para cada analito. El método fue validado en términos de recuperación de extracción, presición intraensayos (repetitibilidad) y límites de detección (LOD) con LODs de 1 hasta 2 ng/ml.