Validación del método de tinción árbol de Navidad para la observación microscópica de espermatozoides

Identificador:  TFM:319

Handle: https://hdl.handle.net/20.500.11797/TFM319

Autores:  Ispan, Denis Andrei

Resumen:
La agresión sexual es un crimen que afecta a muchas personas en todo el mundo. En la mayoría de los casos, los hombres están involucrados y, como resultado, se puede encontrar semen sobre la víctima o en la escena del crimen. Empleando los procedimientos adecuados, mediante la identificación de células espermáticas o fluido seminal, se puede demostrar que tubo lugar la actividad sexual. Determinar quién es el donante de las muestras de semen es el siguiente paso crucial en la investigación. El objetivo de este trabajo fue validar el procedimiento de identificación microscópica de espermatozoides utilizando la tinción árbol de Navidad (Christmas tree) considerando el control de calidad y los estándares de acreditación para la incorporación en el uso rutinario del laboratorio. En primer lugar, para la optimización del estudio, los hisopos con semen revelaron que: i) la tinción funciona bien tanto para la maceración como para el fluido seminal directo al portaobjetos, y que ii) no hay una diferencia significativa en el tampón de maceración utilizado (agua o TE) o en el tiempo de maceración. El uso de DTT a 0,001 M (para una mejor tinción) funcionó bien para volúmenes elevados de semen, pero en los más bajos se rompieron muchos núcleos, lo que impidió su identificación de acuerdo con los estándares establecidos. En segundo lugar, la reproducibilidad del método se aseguró usando varios sustratos: bragas, tela vaquera, hisopos, compresa y salvaslip. En tercer lugar, la evaluación de la sensibilidad indicó que para los hisopos estériles e hisopos con fluido oral y vaginal, el límite de detección es de 1/500 y para la compresa y la tela vaquera es de 1/1000. También hubo variabilidad en la abundancia de células espermáticas entre el donante de semen y las réplicas. Finalmente, se probó la especificidad comparando las células espermáticas con células o estructuras similares que podrían interferir con la identificación. El método confirmatorio descrito en este estudio, considerando las características de identificación descritas, fue capaz de distinguir las células de esperma de otras estructuras similares que podrían encontrarse en muestras de agresiones sexuales y también se estableció el límite de detección, la abundancia y reproducibilidad en varios sustratos.