Optimitzacions de les condicions d'anàlisi i validacions del mètode de detecció i confirmació de pèptids petits per LC-MS/MS

Identificador:  TFM:310

Handle: https://hdl.handle.net/20.500.11797/TFM310

Autors:  Sauras Pastor, Victoria.

Resum:
S’ha optimitzat i validat un mètode analític per a la detecció de pèptids petits en orina humana. Els pèptids petits que s’analitzen són de la família de GHRPS, GHS, GnRH, agents diürètics, factors del creixement i moduladors dels factors de creixement els quals són consumits per alguns atletes ja que generen un efecte ergogènic al cos. El mètode consisteix en una extracció en fase sòlida amb cartutxos OASIS WCX i la separació per cromatografia líquida acoblada a un masses en tàndem (LC-ESI-MS/MS), usant columna C18, (1.7 μm de mida de partícula), la fase mòbil conté de solvent A acetonitril amb 0.1% d’àcid fòrmic i de solvent B aigua MilliQ amb 0.1% d’àcid fòrmic. El programa de gradient comença amb 5% de solvent A i va incrementant fins a 35% en 8 minuts, fins a 80% en el minut 10 i baixa fins a 5% en el següent minut mantenint aquestes condicions fins al minut 15. La detecció es va dur a terme amb ionització per electroesprai en mode positiu monitoritzant les dos millors transicions, ió precursor-ió producte, específiques per a cada analit. El mètode va ser validat en termes recuperació d’extracció, precisió intra-assajos (repetitibilitat) i límits de detecció (LOD) amb LODs de 1 fins a 2 ng/ml.