Data d'alta al repositori: 2018-09-28
Resum: En la actualidad la lipidómica se encuentra en pleno auge. Sin embargo aún existen ciertas limitaciones asociadas a todo estudio lipidómico, entre las que destacan: un método de extracción adecuado (siendo el método de butanol:metanol el más apropiado), un correcto análisis de los resultados. La espectrometría de masas es la herramienta más utilizada pero, otras como la resonancia magnética nuclear están ganando protagonismo en este ámbito dadas las ventajas que presenta como la no necesidad de derivatización de la muestra o su elevada reproducibilidad y sensibilidad. En este trabajo se pretende validar un protocolo de análisis lipidómico mediante resonancia magnética nuclear. Para ello, se estudió qué procedimiento de extracción es el más preciso y la estabilidad lipídica tras ser almacenadas las muestras a distintas temperaturas durante diferentes periodos de tiempo. Se observó que el procedimiento de extracción más preciso era el manual ya que es el que presentó los coeficientes de variación más bajos. Sin embargo, se demostró que la recuperación de glicerofosfolípidos y esfingolípidos era superior cuando se llevaban a cabo las extracciones con el robot. En lo referente a la estabilidad lipídica no se observó la estabilidad esperada a las condiciones de almacenamiento establecidas, pero tampoco se detectó un proceso de degradación lipídica. Factores como el error experimental y la propia variabilidad intrínseca de los lípidos han podido contribuir a la obtención de resultados tan variables. Los resultados obtenidos ponen de manifiesto la necesidad de optimizar el protocolo de extracción con el robot ya que la manual no es compatible con una técnica de alto rendimiento como es la resonancia magnética nuclear. De igual manera, es necesario el estudio de factores adicionales (como los ciclos de congelación y descongelación a los que se ven sometidos las muestras) para una validación completa del protocolo presentado en este trabajo. Currently lipidomics is in full swing. However, there are still certain limitations associated with any lipidomic study, among which are: an adequate extraction method (the butanol: methanol method being the most appropriate) or a correct analysis of the results. Mass spectrometry is the most widely used tool, but others such as nuclear magnetic resonance are gaining prominence in this field given the advantages that it presents as the non-need for derivatization of the sample or its high reproducibility and sensitivity. In this work, we intend to validate a lipidomic analysis protocol using nuclear magnetic resonance. To do this, it was studied which extraction procedure is the most precise and the lipid stability after being stored the samples at different temperatures during different periods of time. It was observed that the most precise extraction procedure was the manual one since it was the one that presented the lowest coefficients of variation. However, it was shown that the recovery of glycerophospholipids and sphingolipids was superior when extractions were carried out with the robot. As regards the lipid stability, the expected stability to the established storage conditions was not observed, but neither was a lipid degradation process detected. Factors such as experimental error and the intrinsic variability of lipids have been able to contribute to obtaining such variable results. The results obtained show the need to optimize the extraction protocol with the robot since the manual is not compatible with a high performance technique such as nuclear magnetic resonance. Likewise, it is necessary to study additional factors (such as the freezing and thawing cycles to which the samples are subjected) for a complete validation of the protocol presented in this paper. En l'actualitat la lipidómica es troba en plena expansió. No obstant això encara hi ha certes limitacions associades a tot estudi lipidómico, entre les quals destaquen: un mètode d'extracció adequat (sent el mètode de butanol: metanol el més apropiat), una correcta anàlisi dels resultats. L'espectrometria de masses és l'eina més utilitzada però, altres com la ressonància magnètica nuclear estan guanyant protagonisme en aquest àmbit donades les avantatges que presenta com la no necessitat de derivatització de la mostra o la seva elevada reproductibilitat i sensibilitat. En aquest treball es pretén validar un protocol d'anàlisi lipidómico mitjançant ressonància magnètica nuclear. Per a això, es va estudiar quin procediment d'extracció és el més precís i l'estabilitat lipídica després de ser emmagatzemades les mostres a diferents temperatures durant diferents períodes de temps. Es va observar que el procediment d'extracció més precís era el manual ja que és el que va presentar els coeficients de variació més baixos. No obstant això, es va demostrar que la recuperació de glicerofosfolípids i esfingolípids era superior quan es duien a terme les extraccions amb el robot. Pel que fa a l'estabilitat lipídica no es va observar l'estabilitat esperada a les condicions d'emmagatzematge establertes, però tampoc es va detectar un procés de degradació lipídica. Factors com l'error experimental i la pròpia variabilitat intrínseca dels lípids han pogut contribuir a l'obtenció de resultats tan variables. Els resultats obtinguts posen de manifest la necessitat d'optimitzar el protocol d'extracció amb el robot ja que la manual no és compatible amb una tècnica d'alt rendiment com és la ressonància magnètica nuclear. De la mateixa manera, és necessari l'estudi de factors addicionals (com els cicles de congelació i descongelació a què es veuen sotmesos les mostres) per a una validació completa del protocol presentat en aquest treball.
Matèria: Bioquímica i biotecnologia
Idioma: spa
Codirector del treball: Gil Serret, Miriam
Àrees temàtiques: Bioquímica y biotecnología Biochemistry and biotechnology Bioquímica i biotecnologia
Departament: Bioquímica i Biotecnologia
Estudiant: Ozcariz García, Enrique
Curs acadèmic: 2017-2018
Títol en diferents idiomes: Validación de un procedimiento de análisis lipidómico mediante resonancia magnética nuclear Validation of a lipidomic analysis procedure by nuclear magnetic resonance Validació d'un procediment d'anàlisi lipidómico mitjançant ressonància magnètica nuclear
Data de la defensa del treball: 2018-06-27
Drets d'accés: info:eu-repo/semantics/openAccess
Paraules clau: Lipidómica, Resonancia Magnética Nuclear, Extracción lipídica Lipidomics, Nuclear Magnetic Resonance, Lipid Extraction Lipidómica, Ressonància Magnètica Nuclear, Extracció lipídica
Confidencialitat: No
Crèdits del TFG: 9
Títol en la llengua original: Validación de un procedimiento de análisis lipidómico mediante resonancia magnética nuclear
Director del projecte: Ugarte Chicote, Javier
Ensenyament(s): Biotecnologia
Entitat: Universitat Rovira i Virgili (URV)
Repositori URV