Validació d'un nou protocol d'extracció de tetrodotoxina en mostres de musclo, ostra y navalla per a la seva aplicació en l'assaig mELISA

Identificador:  TFG:2137

Handle: https://hdl.handle.net/20.500.11797/TFG2137

Autors:  Reverté Navarro, Jaume

Resum:
Durant els darrers 10 anys, la presència de tetrodotoxina (TTX) en mariscs europeus ha estat reportada en nombrosos casos. Aquesta situació ha evidenciat un important problema de seguretat alimentària a tot Europa. Fins ara, cap dels mètodes de cribratge per a la detecció de TTX havia estat validat per a l'anàlisi de mostres de marisc. Per aquesta raó, la detecció de TTX a marisc havia de realitzar-se amb la tecnologia LS-MS/MS. Els costos elevats i la complexitat derivats d'aquesta tècnica analítica van impulsar la innovació i la creació de noves tecnologies per a la detecció de TTX en marisc. D'aquesta innovació va néixer l'assaig mELISA. Aquest immunoassaig va demostrar ser vàlid i específic cap a la TTX, però també va evidenciar molts problemes derivats de l'efecte matriu produït pels extractes de marisc. Per aquesta raó, en aquest estudi, s'avalua un nou protocol d'extracció per aplicar-lo a l'assaig mELISA amb la intenció de reduir els efectes de la matriu. De l'anàlisi dels extractes obtinguts amb el nou protocol, vam poder establir unes concentracions de treball noves on l'efecte matriu desapareixia. Aquestes concentracions d'extracte eren: 150 mg/mL (navalla), 25 mg/ml (ostra) i 5 mg/mL (musclo). Treballant a aquestes concentracions, la detecció de TTX amb el mELISA només va ser possible en el cas de les ostres i les navalles (concentracions de detecció de 40 µg/kg i 640 µg/kg, respectivament). A més, també es va apreciar una ineficiència en el protocol d'extracció. Quan es treballava amb navalla, només el 70% de la TTX total present a les mostres era recuperada després del procés d'extracció i, en el cas de l'ostra, aquesta recuperació només era del 15%. Tot i que les recuperacions de TTX no eren altes en tots els casos, es va poder provar que el nou protocol d'extracció continuava sent vàlid per a la detecció de TTX amb el mELISA en el cas de la navalla i l'ostra.