Funcionalización de electrodos serigrafiados de oro para el desarrollo de biosensores electroquímicos

Identificador:  TFG:1631

Handle: https://hdl.handle.net/20.500.11797/TFG1631

Autores:  Pérez Mora, David

Resumen:
La distrofia muscular miotónica es una enfermedad que causa debilitamiento muscular progresivo y dificultad para relajar el músculo cuando está contraído. Las personas que la padecen presentan niveles anormalmente elevados de IL-6 y TNF-α. La detección de estas citoquinas podría suponer un avance para el desarrollo de tratamientos preventivos para estos pacientes. Este trabajo tiene como objetivo el desarrollo de un sistema inmunosensor de transducción electroquímica para la detección de estas citoquinas en muestras de músculo esquelético. Se describen los diferentes pasos de optimización para el desarrollo de este inmunosensor, el cual se basa en el uso de electrodos serigrafiados de oro. El principio de este es la elevada afinidad que presentan estas inmunoglobulinas por su correspondiente antígeno. La construcción del inmunoensayo consta de una monocapa autoensamblada o SAM, la inmovilización del anticuerpo mediante un paso previo de activación, el reconocimiento del analito o antígeno a detectar, la adición de un segundo anticuerpo anti-antígeno biotinilado y, finalmente, la adición del bioconjugado estreptavidina peroxidasa de rábano picante (SAv-HRP), enzima que produce la señal gracias a la adición del correspondiente sustrato. Diversos diseños experimentales fueron desarrollados con la finalidad de optimizar los diferentes parámetros de la construcción del inmunoensayo, además del pretratamiento de los electrodos y el bloqueo de estos tras la inmovilización del anticuerpo, para eliminar posibles interacciones no específicas. El mejor método para pretratar los electrodos de oro fue el UV/O3 cleaner durante 15 minutos. En referencia a la propia construcción del inmunoensayo, la configuración de la SAM y del bloqueo que dio mejores resultados fue mediante el uso del DTSSP 5 mM como SAM y el uso de BSA 1%, respectivamente. Por otro lado, los resultados mostraron que las uniones inespecíficas eran producidas principalmente por el anticuerpo biotinilado, con una pequeña contribución por parte del bioconjugado SAv-HRP.