Caracteritzación de vhs2 como supressor multicopia de la toxicidad por sobre expressión de la fosfatasa ppz1

Identificador:  TFG:2126

Handle: https://hdl.handle.net/20.500.11797/TFG2126

Autores:  Tinoco Gil, Natàlia

Resumen:
La proteína fosfatasa de tipo Z 1 (Ppz1) se encuentra únicamente en hongos. Esta fosfatasa, juega un papel importante en la tolerancia osmótica y salina, participa en el mantenimiento de la pared celular y, además, se encuentra implicada en la progresión del ciclo celular. Ha sido observado que la sobreexpresión de esta proteína es tóxica para Sacharomyces cerevisiae, así, se cree que su desregulación podría ser una buena diana para las nuevas terapias antifúngicas. A día de hoy, sólo dos inhibidores de esta fosfatasa han sido descritos, Hal3 y Vhs3. En este trabajo se perseguía el objetivo de caracterizar Vhs2 como supresor de la toxicidad derivada de la sobreexpresión de Ppz1 así como crear dos mutantes diferentes de VHS2 para analizar si la fosforilación/desfosforilación de la proteína tenía algún efecto en la recuperación del fenotipo tóxico provocado por la sobreexpresión de Ppz1. Primeramente, a través de tecnología del ADN recombinante se crearon las dos versiones mutadas de VHS2, en las que se sustituyó la serina 314, por Alanina y Aspártico, mimentizando así una desfosforilación y una fosforilación de la proteína, respectivamente. Posteriormente se llevaron a cabo ensayos de crecimiento en los que se notificó que las cepas que presentaban sobreexpresión de Vhs2 eran capaces de revertir la toxicidad más efectivamente que las cepas wild type pero no de la misma manera que lo hacen aquellas cepas que sobre expresan HAL3. Además, en estos ensayos, también se reveló que no existían diferencias entre los fenotipos de los dos mutantes de Vhs2 estudiados durante el proyecto. Por último, los resultados de los estudios de immunoblotting, sugirieron que la sobreexpresión de Ppz1 causa del aumento de los niveles de expresión de Vhs2. Sin embargo, no se percibió una relación directa entre los niveles de expresión de ambas proteínas.