Diseny y desenvolupament d'un sistema electrònic d'instrumentació per high resolution melting curve analysis

Identificador:  TFM:186

Handle: https://hdl.handle.net/20.500.11797/TFM186

Autors:  Escobar Nassar, Santiago

Resum:
Abstracte: El disseny i el desenvolupament d'un bloc d'escalfament és aquí reportat. Aquesta unitat forma part d'un nou sistema electrònic d'instrumentació, dissenyat especialment per desenvolupar una “electrochemically marked high resolution melting curve analysis” amb què es pretén fer la múltiple detecció de SNPs i mutacions. El sistema explicat aquí consisteix de dues plaques d'alumini que seran escalfades de manera controlada usant una modulació d'amplada de pols implementada en un Arduino UNO. El processament de dades i més precisament el control de la temperatura a les diferents resolucions d'escalfament serà desenvolupat mitjançant un controlador de tipus proporcional integral, també implementat a Arduino. Com a model per a les proves d'escalfament, es va utilitzar una placa de vidre amb un sistema microfluídic realitzat a PMMA (model que simula el comportament real d'un array d'elèctrodes). Aquestes proves van ser realitzades per validar la funcionalitat i eficiència del sistema. A més d'això, un array d'un i tretze elèctrodes van ser modificats amb cadenes simples d'ADN funcionalitzades covalentment amb un ditiol, per després ser incubats amb una cadena de polyA marcada amb “horseradish peroxidase” (HRP). Aquests elèctrodes van ser exposats a una solució composta de “tetramethylbenzidine dihydrochloride” (TMB) i peròxid d'hidrogen (H2O2) per poder determinar la millor raó de cobertura per als elèctrodes. Una cronoamperometria ràpida va ser utilitzada per determinar la millor raó entre la quantitat de sonda i la substància de bloqueig. Aquesta dada serà utilitzada per fer futures experimentacions amb un sistema d'ADN model.