Diseño y desarrollo de un sistema electronico de instrumentacion para high-resolution melting curve analysis

Identificador:  TFM:186

Handle: https://hdl.handle.net/20.500.11797/TFM186

Autores:  Escobar Nassar, Santiago

Resumen:
Abstract: El diseño y desarrollo de un bloque de calentamiento es aquí reportado. Esta unidad hace parte de un sistema electrónico de instrumentación novedoso, diseñado especialmente para desarrollar una “electrochemically marked high resolution melting curve analysis” con el que se pretende realizar la múltiple detección de SNPs y mutaciones. El sistema aquí explicado consiste de dos placas de aluminio que serán calentadas de manera controlada usando una modulación de ancho de pulso implementado en un Arduino UNO. El procesamiento de datos y más precisamente el control de la temperatura a las diferentes resoluciones de calentamiento será desarrollado mediante un controlador de tipo proporcional integral, también implementado en el Arduino. Como modelo para las pruebas de calentamiento, se utilizó una placa de vidrio con un sistema microfluídico realizado en PMMA ( modelo que simula el comportamiento real de un array de electrodos). Dichas pruebas fueron realizadas para validar la funcionalidad y eficiencia del sistema. Además de esto, un array de uno y trece electrodos fueron modificados con cadenas simples de ADN funcionalizadas covalentemente con un ditiol, para luego ser incubados con una cadena de polyA marcada con “horseradish peroxidase” (HRP). Estos electrodos fueron expuestos a una solución compuesta de “tetramethylbenzidine dihydrochloride” (TMB) y peróxido de hidrogeno (H2O2) para poder determinar la mejor razón de cobertura para los electrodos. Una cronoamperometría rápida fue utilizada para determinar la mejor razón entre la cantidad de sonda y la sustancia de bloqueo. Este dato será utilizado para realizar futuras experimentaciones con un sistema de ADN modelo.