Validation of “Christmas tree” staining method for microscopic observation of spermatozoa

Entitat: Universitat Rovira i Virgili (URV)

Confidencialitat: No

Ensenyament(s): Genètica, Física i Química Forense

Títol en diferents idiomes: Validació del mètode de tinció arbre de Nadal per la observació microscòpica dels espermatozoides

Resum: L'agressió sexual és un delicte que afecta a moltes persones en tot el món. En la majoria dels casos, els homes estan implicats i, com a conseqüència, es pot trobar semen sobre la víctima o a l'escena del crim. Utilitzant els procediments adequats, mitjançant la identificació de cèl·lules espermàtiques o fluid seminal, es pot demostrar que ha tingut lloc l'activitat sexual. Determinar a qui pertany l’esperma és el següent pas crucial en la investigació. L'objectiu d'aquest treball ha sigut validar el procediment d'identificació microscòpica de l'esperma mitjançant la tinció de l’arbre de Nadal (Christmas tree) considerant normes de control de qualitat i acreditació per la incorporació en la rutina del laboratori. En primer lloc, per a l'optimització de l'estudi, hisops amb esperma han revelat que: i) la tinció funciona bé tant per a la maceració com per al líquid seminal directe al portaobjectes, i que ii) no hi ha diferències significatives en el tampó de maceració utilitzat (aigua o TE) o el temps de maceració. L'ús de DTT a 0,001 M (per la obtenció d’una millor tinció) ha funcionat bé en volums elevats de semen però en els més baixos, moltes nuclis d’espermes es trenquen fet que impedeix la seva identificació d'acord amb els estàndards establerts. En segon lloc, s’ha assegurat la reproducibilitat del mètode en diversos substrats: calces, texà, hisop, salvaslip i compressa. En tercer lloc, l'avaluació de la sensibilitat indica que, per als hisops estèrils i hisops amb fluid bucal i vaginal, el límit de detecció és de 1/500 i per a la compresa i texà és de 1/1000. També s’han trobat variabilitat en l'abundància de cèl·lules espermàtiques entre el donant i les rèpliques. Finalment, s’ha avaluat l'especificitat comparant cèl·lules espermàtiques amb cèl·lules o estructures similars que podrien interferir en la identificació. El mètode confirmatori descrit en aquest estudi ha sigut capaç de distingir, tenint en compte les característiques d'identificació descrites, les cèl·lules espermàtiques d'altres estructures similars que es podrien trobar en mostres d'agressions sexuals i també s’ha establert el límit de detecció, l’abundància i reproducibilitat en diversos substrats.

Matèria: Química

Curs acadèmic: 2017-2018

Idioma: Anglès

Data de la defensa del treball: 2018-06-26

Àrees temàtiques: Química

Estudiant: Ispan, Denis Andrei

Codirector del treball: Terra Barbadora, Ximena

Departament: Bioquímica i Biotecnologia

Data d'alta al repositori: 2018-09-27

Crèdits del TFM: 18

Paraules clau: espermatozoides, tinció arbre de nadal, validació

Títol en la llengua original: Validation of “Christmas tree” staining method for microscopic observation of spermatozoa

Director del projecte: Mosquera Miguel, Ana