Desenvolupament d'assaig de flux lateral basat en un assaig immunosorbent relacionat amb enzim sandwich (ELISA) per a la detecció de ciguatoxina en mostres de peix

Identificador:  TFM:599

Handle: https://hdl.handle.net/20.500.11797/TFM599

Autors:  Ragasa Reintar, Sharmaine

Resum:
La intoxicació per peixos de Ciguatera (CFP) és causada per la ingestió de peixos contaminats amb una toxina marina anomenada ciguatoxina (CTXs). Anualment, es denuncien casos de CFP amb una estimació de 50.000 i aquest valor augmentarà probablement a causa de la globalització del comerç, on els peixos contaminats disseminats a diferents zones juntament amb els problemes d’escalfament global posen en perill encara més el públic. L’evitació del consum de peix ciguateric és difícil pel fet de tenir el mateix aspecte, olor i sabor amb el peix no tòxic i no es pot inactivar per congelació o cuina. A més, actualment els mètodes disponibles com ara el bioassaig de ratolí, els mètodes d’anàlisi i d’immunoassaig no tenen capacitat per afrontar la fiabilitat, la sensibilitat i la senzillesa per detectar CTXs en el punt de necessitat de la pesca. Per tant, es necessita urgentment un assaig fiable, sensible i portàtil per a la detecció rutinària de CTXs. Assaig de flux lateral (LFA), un assaig comunament implementat ha guanyat un gran interès en el mercat per la seva simplicitat, fiabilitat i precisió per detectar varietat d’analits objectiu. No obstant això, un inconvenient d'aquest assaig pot tenir una sensibilitat en què el format i els immunoreagents utilitzats tenen un paper important. En aquest treball es van utilitzar diferents nanopartícules com nanopartícules de carboni, nanopartícules d'or i microsfores de làtex com a etiquetes de reporter i es van comparar les seves prestacions. A més, es va utilitzar IgG de conill com a objectiu de mostra i es van utilitzar anticossos contra IgG de conill com a prova del concepte a causa de les petites quantitats de CTXs disponibles. Entre les partícules estudiades, les nanopartícules de carboni van demostrar donar els resultats més sensibles i després es van aplicar a la detecció de la ciguatoxina. Hem desenvolupat amb èxit un LFA basat en sandvitx ELISA, que pot detectar simultàniament els quatre principals congèners de ciguatoxina (CTX1B, 54-­‐desoxiCTX1B, CTX3C i 51-­‐ hidroxiCTX3C) barrejant els anticossos monoclonals 3G8 i 10C9 com a sonda de captura i l'anticòs 8H4 conjugat al carboni. nanopartícula com a etiqueta de reporter. El test es va provar utilitzant mostres estàndard de CTX1B, i després es van aplicar mostres reals que contenien ciguatoxines extretes de peix amb un rang de detecció de fins a 35,66 pg / g de mostra de peix.