Development of lateral flow assay based on sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of ciguatoxin in fish samples

Entidad: Universitat Rovira i Virgili (URV)

Confidencialidad: No

Enseñanza(s): Nanociència, Materials i Processos - Tecnologia Química de Frontera 

Título en diferentes idiomas: Desarrollo de un ensayo de flujo lateral basado en un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas sandwich (ELISA) para la detección de ciguatoxina en muestras de peces.

Resumen: La intoxicación por peces Ciguatera (CFP) es causada por la ingestión de peces contaminados con una toxina marina llamada ciguatoxina (CTX). Anualmente, los casos de CFP se informan con una estimación de 50,000 y este valor probablemente aumentará debido a la globalización del comercio, donde los peces contaminados diseminados en diferentes áreas junto con problemas de calentamiento global pondrán en peligro aún más al público. Evitar el consumo del pescado ciguaterico es difícil debido a que tiene el mismo aspecto, olor y sabor que el pescado no tóxico y no se puede inactivar por congelación o cocción. Además, los métodos disponibles en la actualidad, como el bioensayo de ratón, los métodos analíticos y de inmunoensayo, son insuficientes para abordar la confiabilidad, la sensibilidad y la simplicidad para detectar CTX en el punto de necesidad en las pesquerías. Por lo tanto, se necesita con urgencia un ensayo confiable, sensible y portátil para la detección de rutina de CTX. El ensayo de flujo lateral (LFA), un ensayo implementado comúnmente, ha ganado un gran interés en el mercado debido a su simplicidad, confiabilidad y precisión para detectar una variedad de analitos objetivo. Sin embargo, una desventaja de este ensayo puede ser la sensibilidad en la cual el formato y los inmunorreactivos utilizados juegan un papel importante. En este trabajo, utilizamos diferentes nanopartículas como nanopartículas de carbono, nanopartículas de oro y microesferas de látex como etiquetas informadoras y comparamos sus rendimientos. Además, se utilizó IgG de conejo como muestra objetivo y se utilizaron anticuerpos contra IgG de conejo como prueba de concepto debido a las pequeñas cantidades de CTX disponibles. Entre las partículas estudiadas, las nanopartículas de carbono demostraron dar los resultados más sensibles y luego se aplicaron a la detección de ciguatoxina. Desarrollamos con éxito un LFA basado en ELISA sandwich, que puede detectar simultáneamente los cuatro principales congéneres de ciguatoxina (CTX1B, 54-­‐deoxyCTX1B, CTX3C y 51-­‐hydroxyCTX3C) al mezclar los anticuerpos monoclonales 3G8 y 10C9 como sonda de captura y el anticuerpo 8H4 conjugado con carbono nanopartícula como etiqueta de reportero. El ensayo se probó usando muestras estándar de CTX1B, y luego se aplicaron muestras reales que contenían ciguatoxinas extraídas de peces con un rango de detección de hasta 35,66 pg / g de muestra de pescado.

Materia: Enginyeria química

Curso académico: 2018-2019

Idioma: Anglès

Fecha de la defensa del trabajo: 2019-09-10

Áreas temàticas: Ingeniería química

Estudiante: Ragasa Reintar, Sharmaine

Codirector del trabajo: Jauset Rubio, Miriam

Departamento: Enginyeria Química

Fecha de alta en el repositorio: 2021-03-11

Creditos del TFM: 24

Palabras clave: Ciguatoxina, ensayo de flujo lateral, nanopartículas de carbono

Título en la lengua original: Development of lateral flow assay based on sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of ciguatoxin in fish samples

Director del proyecto: O’Sullivan, Ciara K.