Determinación de poliaminas en orina mediante UHPLC-MS/MS

Identificador:  TFM:315

Handle: https://hdl.handle.net/20.500.11797/TFM315

Autores:  Ribas López, Verónica

Resumen:
En els últims anys, s'ha demostrat que les poliamines són un candidat potencial per actuar com a biomarcadors de càncer. En aquest treball s'ha desenvolupat un mètode per acoblament de cromatografia líquida d'alt rendiment amb espectrometria de masses triple quadrupol (UHPLC-MS/MS) per a la determinació simultània de precursors de poliamines, poliamines i catabolits de poliamina en l'orina humana. Els precursors de la poliamina inclouen l'ornitina, la lisina i l'arginina; les poliamines incloent-hi l'agmatina, putrescina, cadaverina, 1,3-diaminopropana, espermina, N-acetilputrescina, N1-acetilspermidina, N1,N8-diacetilspermidina i N1,N12-dialcetilspermina; el catabolit de poliamina incloent-hi àcid Υ-aminobutíric s'havia determinat. Les mostres han estat pretractades utilitzant diferents procediments per comparar-les i triar el més adequat. El primer pas consisteix en una precipitació de les poliamines mitjançant l'extracció de metanol i cloroform o àcid percloric, seguit per la derivatització amb clorur de dansil. L'última extracció s'ha dut a terme amb extracció de fase sòlida o extracció líquid-líquid amb acetat d'etil i TFA. El procediment seleccionat ha estat l'extracció amb metanol i cloroform/ derivatització/ líquid-líquid a causa del seu efecte de matriu inferior i una millor recuperació. Les poliamines derivades s'han separat amb una columna C18 utilitzant un programa gradient. La detecció s'ha dut a terme amb el sistema UHPLC-MS/MS amb font d'ionització electroesprai en l'ió positiu (ESI+) i mode de seguiment de múltiples reaccions (MRM). La corba de calibratge s'ha obtingut per a cada poliamina amb un coeficient de determinació superior a 0,993. Els límits de quantitat per a tots els anàlits estaven a 0.04 i 6.86 ng/ml. Els límits de quantitat per a tots els anàlits estaven dins de 4 amb 32000 ng/ml en orina. Finalment, els CV intra i interdia per a tots els analistes eren 5,23-21.66% i 0,78-18,24%, respectivament.