Identificador: TFG:122
Autors: Gil Pagà, Lourdes
Resum:
S’ha desenvolupat una cromatografia líquida d'alta resolució (LC) acoblada a detecció per espectrometria de masses (-MS/MS) a través d'una font d'ionització química per a la determinació de tetrodotoxines (TTXs) en mostres de peix globus. La separació es basa en la cromatografia d'interacció hidrofílica (HILIC) en una columna XBridge amida (2,1 mm × 100 mm , 3,5 micres de mida de partícula) i les fases mòbils han consistit en acetat d'amoni 30 mM a pH 5,8 i acetonitril 30 mM d’acetat d'amoni (90:10), per a les fases mòbils A i B, respectivament. El gradient d'elució s’ha optimitzat utilitzant mostres de l'espècie de peix globus Lagocephalus sceleratus com a control positiu, de 100% B a 50% d'A en un temps d'execució total de 12 minuts incloent l'equilibrat de la columna. Els paràmetres de detecció de l’espectrometria de masses s’han optimitzat per infusió directa de l’estàndard de TTX a l'espectròmetre, entre altres, un potencial de desagrupació de 50 V i una energia de col·lisió de 29 i 53 V per a les transicions ió precursor > ió producte de m/z 320>302 i 320>162, respectivament. La temperatura de la font d'ions per electroesprai s’ha ajustat a 600ºC després de l'acoblament LC per maximitzar el rendiment d'ionització. El mètode de triple quadrupol de monitorització de reaccions múltiples (MRM) ha permès la determinació de 10 tetrodotoxines diferents en les mostres de peix globus, incloent un peix de l'espècie Sphoeroides pachygaster atrapat a Palamós, costa catalana. S'han obtingut resultats preliminars sobre la validació del mètode, mostrant una bona linealitat en el rang de 25-1250 μg TTX/Kg (r ²=0,999) i un límit de detecció molt baix d'1 μg TTX/Kg. Una avaluació preliminar del peix globus trobat a Catalunya ha revelat una toxicitat molt menor en comparació amb la de L. sceleratus que és altament tòxic. S. pachygaster ha mostrat TTX>25 μg/Kg, només a la pell i a un nivell relativament baix 300 μg TTX/Kg. La posta en marxa i l’optimització d'aquest mètode contribuirà en el futur pròxim a dur a terme l'avaluació del risc de la invasió d'aquests emigrants lessepsians fins al mar Mediterrani.
Repositori URV