Desarrollo de un método de cromatografía de líquidos acoplada a un espectrómetro de masas en tándem para la determinación de tetrodotoxinas

Identificador:  TFG:122

Handle: https://hdl.handle.net/20.500.11797/TFG122

Autores:  Gil Pagà, Lourdes

Resumen:
Se ha desarrollado una cromatografía líquida de alta resolución (LC) acoplada a detección por espectrometría de masas (-MS/MS) a través de una fuente de ionización química para la determinación de tetrodotoxinas (TTXs) en muestras de pez globo. La separación se basa en la cromatografía de interacción hidrofílica (HILIC) en una columna XBridge amida (2,1 mm × 100 mm , 3,5 micras de mida de partícula) y las fases móviles han consistido en acetato de amonio 30 mM a pH 5,8 y acetonitrilo 30 mM de acetato de amonio (90:10), para las fases móviles A y B, respectivamente. El gradiente de elución se ha optimizado utilizando muestras de la especie de pez globo Lagocephalus sceleratus como control positivo, de 100% B a 50% de A en un tiempo de ejecución total de 12 minutos incluyendo el equilibrado de la columna. Los parámetros de detección de la espectrometría de masas se han optimizado por infusión directa del estándar de TTX al espectrómetro, entre otros, un potencial de desagrupación de 50 V y una energía de colisión de 29 i 53 V para las transiciones ion precursor > ion producto de m/z 320>302 i 320>162, respectivamente. La temperatura de la fuente de iones por electroesprai se ha ajustado a 600ºC después del acoplamiento LC para maximizar el rendimiento de ionización. El método de triple cuadrupolo de monitorización de reacciones múltiples (MRM) ha permitido la determinación de 10 tetrodotoxinas diferentes en les muestras de pez globo, incluyendo un pez de la especie Sphoeroides pachygaster pescado en Palamós, costa catalana. Se han obtenido resultados preliminares sobre la validación del método, mostrando buena linealidad en el rango de 25-1250 μg TTX/Kg (r ²=0,999) y un límite de detección muy bajo de 1 μg TTX/Kg. Una evaluación preliminar del pez encontrado en Catalunya ha revelado una toxicidad muy menor en comparación con la de L. sceleratus que es altamente tóxico. S. pachygaster ha mostrado TTX>25 μg/Kg, solo en la piel y a un nivel relativamente bajo 300 μg TTX/Kg. La puesta en marcha y la optimitzación de este método contribuirá en el futuro próximo a llevar a cabo la evaluación del riesgo de la invasión de estos emigrantes lessepsianos del mar Mediterráneo.