Inducción de la respuesta del sistema immunitario a través de la activación de células presentadoras de antígeno mediante aptámeros conjugados

Identificador:  TFG:1615

Handle: https://hdl.handle.net/20.500.11797/TFG1615

Autores:  Gil Pitarch, Clàudia

Resumen:
En este estudio, se investigó la unión de aptámeros conjugados con un péptido antigénico a las células dendríticas (CD) para inducir su activación de forma directa. En consecuencia, las células T, y otro tipo de células efectoras del sistema inmunológico, también se activarían debido a la unión con los CD activados. El objetivo de este estudio fue validar el aptámero D#7, que ya había sido probado en estudios anteriores (Silvana Haβel, 2016). Esto significa que las CDs deben ser evaluadas con y sin el aptámero (conjugado y no conjugado) para saber si están siendo activadas apropiadamente y para descartar que no ocurran uniones no específicas. También se quería determinar si los aptámeros FN#9, FN#12, FN#14, FN#15 y FN#20, podrían utilizarse como moléculas de unión específicas para el desarrollo de inmunoterapias contra varias enfermedades, por ejemplo, contra el cáncer. Estos aptámeros fueron probados en dos líneas celulares: las células THP1 y J774A1, que son monocitos humanos y macrófagos de ratones, respectivamente y en dos condiciones (en Binding Buffer y en medio celular). En la validación D#7 se analizaron 5 receptores celulares diferentes (CD40, CD86, MHC-I, MHC-II y CD80) para determinar si estaban sobre expresados o reprimidos cuando las CDs eran activadas por LPS (lipopolisacáridos) o péptido MHC-I (Complejo de Histocompatibilidad Mayor) mediante el uso de anticuerpos conjugados con un fluoróforo. La unión de los aptámeros y de los anticuerpos fue testada con citometría de flujo. La validación del aptámero D#7 no se completó porque la unión del aptámero no era reproducible y sólo había un receptor celular que estaba sobre expresado (CD40) cuando las CDs fueron activadas por el péptido MHC-I o LPS. En consecuencia, el experimento no se pudo continuar debido a la incoherencia de los resultados obtenidos. Respecto a las pruebas de los aptámeros FN#9, FN#12, FN#14, FN#15 y FN#20, se observó que los aptámeros FN#9 y FN#12 se unieron a las células THP1 y J774A1 en las dos condiciones. FN#20 también se unió a las células J774A1. Aunque, en el caso del medio celular, la fluorescencia del aptámero fue más intensa, así que, probablemente, se unió una cantidad superior de aptámeros.